Obiettivi Formativi

Imparare e comprendere i meccanismi cellulari e molecolari riguardanti le risposte immunitarie e l’alterato funzionamento del sistema immune; i processi infiammatori e la riparazione tissutale; la morte della cellula; l’insorgenza dei tumori. Comprendere l’utilità di un biomarcatore di patologia; apprendere principii e applicazioni di metodiche biochimiche e biomolecolari d’uso comune in diagnostica; comprendere il potenziale delle scienze “omiche” nella Medicina di Precisione.

Learning Goals

Learning and understanding the cellular and molecular mechanisms related to immune responses, inflammatory processes and tissue repair; cell death and tumorigenesis. Understanding the usefulness of disease biomarkers; learning basics and applications of commonly used biochemical and biomolecular methods; understanding the potential of “omics” in Precision Medicine.

Prerequisiti

Buona conoscenza delle basi di Biologia Cellulare, Biologia Molecolare, Biochimica, Anatomia Umana e Fisiologia Umana.

Prerequisites

Good basic knowledge of Cell Biology, Molecular Biology, Biochemistry, Human Anatomy, and Human Physiology.

Programma del Corso

------------------------------------------------------------ Modulo: 2892/1 - PATOLOGIA GENERALE ------------------------------------------------------------ -- ------------------------------------------------------------ Modulo: 4247/1 - BIOCHIMICA CLINICA ------------------------------------------------------------ - Il Laboratorio diagnostico di Biochimica Clinica: biomarcatori, variabilità analitica e variabilità biologica, range di riferimento, tipo di campioni biologici, processo analitico. - Metodiche biochimiche quantitative: curva taratura, metodi di dosaggio delle proteine, metodi colorimetrici e fluorometrici, tecniche immunoenzimatiche (ELISA), cromatografia (HPLC). - Cenni su tecniche separative: centrifugazione, elettroforesi, citofluorimetria (cell sorting). - Cenni sul valore diagnostico dell’emocromo e dell’elettroforesi sieroproteica nella diagnostica di patologie infiammatorie infettive e non, e disordini immunitari. - La diagnostica molecolare: polimorfismi genici, concetto di marcatore molecolare, e utilità delle scienze omiche. - Metodiche biomolecolari: • isolamento degli acidi nucleici (DNA, RNA) da diverse matrici biologiche; • elettroforesi e quantificazione spettrofotometrica degli acidi nucleici; • screening di mutazioni mediante metodi basati su PCR: PCR allele-specifica; nested PCR; multiplex PCR; long PCR; discriminazione allelica con Real-time PCR, reverse Dot Blot; DHPLC; sequenziamento diretto del DNA; Next Generation Sequencing (NGS) basato su pirosequenziamento; microarray di oligonucleotidi per analisi di SNPs. - Analisi dell’espressione genica (trascritti e proteine): Real-time PCR quantitativa assoluta e relativa, microarray a cDNA, Western blotting; microarray di proteine, spettrometria di massa. Attività pratica di laboratorio • Procedure pre-analitiche (manipolazione campioni biologici: accettazione, centrifugazione, preparazione e conservazione aliquote di lavoro) • Dosaggio analiti sierici con tecnica ELISA • Dosaggio analiti sierici con tecnica HPLC • Dosaggio proteine sieriche con metodo Bradford • Determinazione di AOPP sierici con metodo colorimetrico • Analisi di polimorfismi genici mediante Real-time PCR

Course Syllabus

------------------------------------------------------------ Modulo: 2892/1 - PATOLOGIA GENERALE ------------------------------------------------------------ -- ------------------------------------------------------------ Modulo: 4247/1 - BIOCHIMICA CLINICA ------------------------------------------------------------ - The Diagnostic Laboratory of Clinical Biochemistry: biomarkers, analytical variability and biological variability, reference range, type of biological samples, analytical process. - Quantitative biochemical methods: calibration, protein assay methods, colorimetric and fluorometric methods, immunoenzymatic techniques (ELISA), chromatography (HPLC). - Outline of separative techniques: centrifugation, electrophoresis, flow-cytometry (cell sorting). - Notes on the diagnostic value of blood cell counts and serum protein electrophoresis in diagnostics of infectious and non-infectious inflammatory diseases, and immune disorders. - Molecular diagnostics: gene polymorphisms, concept of molecular marker, and usefulness of omics sciences. - Biomolecular methods: • isolation of nucleic acids (DNA, RNA) from different biological matrices; • electrophoresis and spectrophotometric quantification of nucleic acids; • mutation screening by PCR-based methods: allele-specific PCR; nested PCR; multiplex PCR; long PCR; allelic discrimination by Real-time PCR, reverse Dot Blot; DHPLC; direct DNA sequencing; Next Generation Sequencing (NGS) based on pyrosequencing; SNP microarray. • Gene expression analysis (transcripts and proteins): quantitative absolute and relative Real-time PCR, cDNA microarray, Western blotting; protein microarray, mass spectrometry. Training laboratory activities • Pre-analytical procedures (biological sample handling: acceptance, centrifugation, preparation and storage of working aliquots) • Dosage of serum analytes with ELISA technique • Dosing of serum analytes with HPLC technique • Bradford method for serum protein dosing • Determination of serum AOPP by colorimetric method • Analysis of gene polymorphisms by Real-time PCR