Obiettivi Formativi

Il laboratorio di ecocitossicologia e dei principali indicatori biologici, cioè organismi viventi (animali le cui risposte, individuali e/o all’interno della comunità, sono in grado di dare precise indicazioni sulle caratteristiche generali del fenomeno naturale e/o di origine antropica. Abilità: essere in grado di effettuare specifiche metodologie di analisi ecocitossicologiche e di programmare e di valutare il significato dei risultati ottenuti.

Learning Goals

The course aims to provide students with basic knowledge of ecocytotoxicology and use of the main biological indicators, as living organisms whose responses, both individual and community responses, are able to provide precise information on a naturally and/or anthropically generated event. Skills: to be able to perform specific methodologies of ecocytotoxicological analyses, and plan and assess the meaning of the obtained results. Knowledge: on the methodologies applied in the studies of environmental impact. Selection of the relevant environmental components; identification and estimation of the significant impacts on the ecosystems.

Metodi didattici

Esercitazioni pratiche che vengono svolte in piccoli gruppi in laboratorio.

Teaching Methods

For practical activities will be made available for students, as well as the instruments and material needed

Prerequisiti

Conoscenze di base di biologia ed ecologia

Prerequisites

Basic knowledge of biology and ecology.

Verifiche dell'apprendimento

La verifica finale consiste in un esame orale.

Assessment

The final examination consists of an oral exam.

Programma del Corso

•Dissezione di un bioindicatore, procedure di conservazione dei vari materiali biologici, fasi della processazione istologica, reazioni istochimiche ed immunoistochimiche utili a mettere in evidenza: -alterazioni istomorfologiche degli organi bersaglio (branchie e intestino); -risposte di molecole che variano in relazione alla presenza di inquinanti ambientali e pertanto posso essere considerati dei validi biomarkers come l’ossido di azoto sintetasi neuronale (nNOS), la serotonina, l’acetilcolina e alcuni neuropeptidi (PACAP, VIP, 5HT, ecc..); -il turnover cellulare, mediante la tecnica TUNEL e la presenza di cellule PCNA-positive; -produzione di sostanze che tendono a citoproteggere, come la iNOS, detossificare, come il citocromo P450 o le metallotioneine. •Tecniche di laboratorio utili ad evidenziare alterazione del DNA (Commet Assey, test dei micronuclei) •Procedure di estrazione di acidi nucleici e di RT-PCR per analizzare l’espressione genica di molecole biomarkers. •Analisi spettrofotometriche attività acetilcolinesterasi cerebrale “AChE” e butirrilcolinesterasi “BChE” nel plasma. •Analisi spettrofluorimetriche attività enzimatica “EROD” e “BPMO” nel fegato e “IPA” nella bile •Le attività di Laboratorio si svolgono nei locali presso i quali svolge la propria attività di ricerca il docente titolare del corso, le strumentazioni e il materiale necessario. Viene offerta attività di supporto e tutorato per gli studenti che ne faranno esplicita richiesta. •La verifica finale consiste in un esame orale sugli argomenti trattati durante il corso.

Course Syllabus

Dissection of a bioindicator, procedures to store various biological samples, steps for histological processing, histochemical and immunohistochemical reactions, useful to highlight biomarkers; - histomorphological alterations of target organs (gills and liver); - molecule responses varying in relation to the presence of environmental pollutants, and thus considered valid biomarkers, such as the neuronal nitric oxide synthase (nNOS), serotonin, acetylcholine and some neuropeptides (PACAP, VIP, 5TH, etc.); - cell turnover, through the TUNEL technique and the presence of PCNA-positive cells; - production of substances for cytoprotection, i.e. iNOS, and detoxification, i.e. cytochrome P450 or metallothioneines. • Techniques of laboratory aimed at highlight alteration of DNA (Comet Assay, test of micronuclei); • Procedures of extraction of nucleic acids and RT-PCR to analyze the gene expression of biomarker molecules. • Spectrophotometric analysis, activity of cerebral acetylcholine esterase “AChE” and butyrylcholine esterase “BChE” in plasma. • Spectrofluorimeric analyses, enzymatic activity of “EROD” and “BPMO” in liver and “IPA” in bile. For practical activities, the workrooms where the regular teacher of the course performs his own research activity, will be made available for students, as well as the instruments and material needed.