Obiettivi Formativi

Principali obiettivi del corso: - far acquisire conoscenze teoriche e pratiche riguardo le procedure utilizzate nel Laboratorio di Virologia Molecolare - descrivere le tecniche usate comunemente nei laboratori di diagnostica molecolare virologica. In particolare saranno dettagliati i principi, le applicazioni, i vantaggi ed i limiti di ciascuna tecnica. - fornire nozioni necessarie alla: 1. comprensione della struttura, del ciclo vitale dei virus e della loro evoluzione 2. comprensione dei meccanismi della risposta immune dell’ospite alle infezioni virali 3. comprensione della patogenesi delle infezioni virali - Comprendere il ruolo dell’interazione tra assetto genetico individuale e fattori ambientali nello sviluppo delle patologie multifattoriali; conoscere i biomarcatori molecolari delle patologie multifattoriali più rilevanti e la loro utilità per screening preventivi, diagnosi, monitoraggio della terapia, e prognosi; apprendere e saper utilizzare le principali tecniche di routine per la diagnostica molecolare.

Prerequisiti

Buone conoscenze di biologia molecolare, fisiologia, patologia generale, biochimica

Programma del Corso

------------------------------------------------------------ Modulo: A000420 - MOLECULAR BIOMARKERS OF MULTIFACTORIAL DISORDERS ------------------------------------------------------------ Marcatori molecolari di disordini multifattoriali Diagnostica molecolare: le scienze omiche. Third generation sequencing Strategie di identificazione dei marcatori molecolari, predittivi, diagnostici e prognostici per le patologie: cardiometaboliche, osteoporosi, tumori solidi ed ematologici, da ipersensibilità, neurodegenerative da stress proteolitico, disordini autoimmuni. Nutrigenomica e Nutrigenetica. Farmacogenetica Trascrittomica mediante NGS. Diagnostica basata sull’analisi delle modificazioni epigenetiche: analisi dello stato di metilazione, miRNoma. Diagnostica basata su approcci di Proteomica. Diagnostica basata su approcci di Metabolomica e Interattomica. Diagnostica basata su approcci di Lipidomica Attività pratica di laboratorio Procedure pre-analitiche (manipolazione campioni biologici: accettazione, centrifugazione, preparazione e conservazione aliquote di lavoro) Dosaggio analiti sierici con tecnica ELISA Isolamento DNA genomico da campioni salivari Elettroforesi del DNA genomico Quantificazione del DNA genomico Quantificazione assoluta e screening di polimorfismi genici mediante Real-time PCR ​​​​​​​ ------------------------------------------------------------ Modulo: A000421 - MOLECULAR DIAGNOSTICS IN VIROLOGY ------------------------------------------------------------ Tecniche Virologiche: Tecniche diagnostiche basate sulle colture cellulari e tissutali: Colture cellular e virali convenzionali Effetti citopatici Percentuali di crescita Quantificazione attraversop plaque-forming units e TCID50 Ibridizzazione in situ Analisi fenotipica delle varianti virali Tecniche molecolari: Struttura degli acidi nucleici e processamento dei campioni virali Tecniche di PCR utilizzate in virologia: Droplet digital PCR, Nested PCR, Multiplex PCR Controlli PCR Test per valutar la carica virale Nucleic acid tests (NAT)​​​​​​​ Identificazione virale e genotyping attraverso Sanger sequencing eNext generation sequencing Test di resistenza agli Agenti Antivirali ad Azione Diretta Virtual Phenotype Resistance Assay Diagnostica Virologica: Tipo di campione biologico per la rilevazione virologica, strumenti per la raccolta ed il trasporto dei campioni, comparazione tra gli assay utilizzati per la diagnosi delle infezioni virali, linee guida e standards per i test di virologia molecolare. Patogenesi virale: vie d’ingresso replicazione virale, tropismo virale and e diffusione ai siti di diffusione nell’ambiente Generalità sulle specie virali d’interesse bio-medico Virus respiratori Virus Epatitici Viruses responsabili di sindromi multiple Virus opportunistici associate ad immunosuppressione Retrovirus Umani Virus Oncogenetici Virus Zoonotici Arbovirus Marcatori molecolari di disordini multifattoriali Diagnostica molecolare: le scienze omiche. Third generation sequencing Strategie di identificazione dei marcatori molecolari, predittivi, diagnostici e prognostici per le patologie: cardiometaboliche, osteoporosi, tumori solidi ed ematologici, da ipersensibilità, neurodegenerative da stress proteolitico, disordini autoimmuni. Nutrigenomica e Nutrigenetica. Farmacogenetica Trascrittomica mediante NGS. Diagnostica basata sull’analisi delle modificazioni epigenetiche: analisi dello stato di metilazione, miRNoma. Diagnostica basata su approcci di Proteomica. Diagnostica basata su approcci di Metabolomica e Interattomica. Diagnostica basata su approcci di Lipidomica Attività pratica di laboratorio • Procedure pre-analitiche (manipolazione campioni biologici: accettazione, centrifugazione, preparazione e conservazione aliquote di lavoro) • Dosaggio analiti sierici con tecnica ELISA • Isolamento DNA genomico da campioni salivari • Elettroforesi del DNA genomico • Quantificazione del DNA genomico •Quantificazione assoluta e screening di polimorfismi genici mediante Real-time PCR ​​​​​​​