Obiettivi Formativi

Linsegnamento promuove nello studente la conoscenza delle caratteristiche dei fluidi biologici e dei principali metodi di analisi. Le esercitazioni di laboratorio favoriranno la comprensione dei vari metodi di determinazione dei principali analiti presenti nei fluidi biologici e serviranno ad acquisire familiarità con le principali tecniche analitiche, quali, spettrofotometria UV-VIS, spettrometria di assorbimento atomico, potenziometria con elettrodi iono-selettivi.

Metodi didattici

Lezioni frontali in aula; esercitazioni di laboratorio con utilizzazione di strumentazione utile alla determinazione di analiti di interesse chimico-clinico.

Prerequisiti

Conoscenze di base di chimica analitica, in particolare equilibri in soluzione acquosa. Conoscenze di chimica analitica strumentale, in particolare di spettrofotometria UV-VIS, spettrometria di assorbimento atomico, potenziometria e voltammetria.

Verifiche dell'apprendimento

La verifica dell'apprendimento prevede una prova orale e la valutazione delle relazioni sulle singole prove di laboratorio.

Programma del Corso

Caratteristiche e composizione dei principali materiali biologici (2 ore). Caratteristiche e composizione del sangue. Regolazione dellequilibrio acido-base. Caratteristiche e composizione degli altri principali materiali biologici. Raccolta dei materiali biologici (2 ore). Condizioni di prelievo di sangue. Tipi di campione. Anticoagulanti e preservanti. Prelievo di altri materiali biologici. Variabilità preanalitica. Trattamento e conservazione dei materiali biologici (2 ore). Sieratura e centrifugazione. Conservazione dei materiali biologici per indagini chimico-cliniche. Cause di alterazione del campione. Provvedimenti e prescrizioni per la migliore conservazione dei campioni. Metodi di separazione per lisolamento delle biomolecole. Variabilità analitica. Lerrore di laboratorio (2 ore). Classificazione degli errori di misura. Errore totale: limiti fiduciari, coefficiente di variazione (CV), limiti accettabili dellerrore. Controllo dei metodi. Stabilità dei reagenti. La sicurezza della qualità nel laboratorio (2 ore). Controllo interno di qualità: obiettivi per limprecisione analitica, obiettivi per linaccuratezza analitica, obiettivi per lerrore analitico totale, carte di controllo (metodo di Shewart-Levey-Jannings). Scopo del controllo interno di qualità. Valutazione esterna di qualità. Variabilità biologica e valori di riferimento (2 ore). Fattori che influenzano i valori di riferimento. Produzione e presentazione dei valori di riferimento. Metodologie problematiche inerenti la produzione dei valori di riferimento. Variabilità biologica intraindividuale e differenza critica dei test di laboratorio. Misura della variabilità biologica intraindividuale. Confronto dei risultati attuali di un paziente con quelli precedenti: la differenza critica. Impiego della differenza critica nellinterpretazione dei test di laboratorio. Determinazione enzimatica di analiti di interesse clinico (4 ore). Dosaggio con enzimi dei metaboliti. Enzimi immobilizzati. Metodi di studio degli isoenzimi. Struttura, caratteristiche elettroforetiche e distribuzione dei principali isoenzimi. Significato clinico dellattività degli enzimi presenti nei materiali biologici: siero. Studio dellattività degli enzimi sierici. Comportamento di alcuni enzimi sierici in condizioni patologiche. Immunochimica (6 ore). Antigeni e apteni. Anticorpi. Produzione di antisieri. Produzione di anticorpi monoclonali. Reazione antigene-anticorpo. Reazione quantitativa di precipitazione. Reazione di immunoprecipitazione in gel. Immunodiffusione radiale semplice. Immunoprecipitazione in mezzo liquido. Principi e tecniche in immunometria. Determinazioni competitive e non competitive. Determinazioni in fase eterogenea e in fase omogenea. Fattori critici che influenzano le determinazioni immunometriche. Traccianti e tecniche di rivelazione del segnale. La relazione concentrazione-segnale analitico. Metodi radioimmunologici (RIA). Dosaggio immunoradiometrico (IRMA). Dosaggio ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay). Tecnica enzimo-immunochimica in fase omogenea (EMIT). Dosaggi immunologici con marcatori fluorescenti (FIA). Dosaggi immunologici con marcatori luminescenti (LIA). Immunodosaggi mediante bioluminescenza. Immunodosaggi mediante chemiluminescenza (CL). Immunodosaggi mediante il complesso avidina-biotina. Applicazioni cliniche dei metodi immunochimici. Biomarcatori (2 ore). Definizione. Biomarcatori del sistema cardio-renale. Gli ormoni come biomarcatori di funzione e di malattia. I principali biomarcatori in oncologia. Esercitazioni di Laboratorio: Determinazione di analiti di interesse chimico-clinico mediante spettroscopia UV-VIS, spettroscopia di assorbimento atomico, potenziometria con elettrodi ionoselettivi (24 ore).